Мук лабораторная диагностика малярии

Мук лабораторная диагностика малярии

Диагностика малярии основана на данных клинических проявлений, эпидемиологического расследования и лабораторных методах исследования, включающих методики выявления паразитов, их количества, видовую принадлежность и обнаружение антител в организме исследуемого. Обследованию в первую очередь подлежат пациенты из группы риска — прибывшие из эндемичных по малярии регионов, лихорадка у которых появилась в первые два года после выезда из этих регионов.

Рис. 1. Забор крови для приготовления препарата «толстая капля».

Рис. 2. Окраска и вид препаратов «толстая капля» и тонкий мазок.

Диагностика малярии с использованием микроскопического метода

Микроскопия препарата «толстая капля» и тонкого мазка, позволяющая обнаружить паразитов, их количество и видовую принадлежность, является ведущим методом диагностики малярии. Она проводится при малейшем подозрении на это заболевание, независимо от температурной реакции пациента. Для определения видовой принадлежности паразитов и стадии заболевания используется тонкий мазок крови. В толстой капле локализуется больше паразитов, чем в мазке. Этот метод диагностики превосходит методику определения наличия возбудителей малярии в тонком мазке крови в 20 — 40 раз.

В периферической крови паразиты обнаруживаются через определенное время после заражения:

  • при 3-х дневной малярии — через 8 — 12 дней,
  • при тропической — от пяти с половиной дней до 12,
  • при 4-х дневной — через 15 — 21 день,
  • при малярии, подобной 3-х дневной — через 9 — 15 дней.

Паразиты в крови присутствуют как во время лихорадочного приступа, так и в межприступный период и при паразитоносительстве.

Рис. 3. Техника приготовления тонкого мазка.

Техника приготовления «толстой» капли

Полученная при проколе пальца капля крови наносится на предварительно очищенное и сухое предметное стекло и размазывается до получения пятна 1 см в диаметре. После подсушивания на воздухе предметное стекло заливается краской Романовского—Гимзы. По истечении 40-минутной экспозиции препарат ополаскивается под проточной водой и подсушивается при комнатной температуре, установленный в вертикальное положение.

Под микроскопом исследуется не менее 100 полей зрения. Более эффективным считается исследование 2-х толстых капель в течение 2,5 минут, чем 1-й капли в течение 5-и минут. 100 полей зрения просматриваются даже в том случае, когда малярийные плазмодии выявились уже в первых полях. Это производится для того, чтобы не пропустить микст-инфекцию.

Рис. 4. Микроскопия препарата «толстая капля» и тонкого мазка является ведущим методом диагностики малярии.

Порог обнаружения паразитов

Порогом обнаружения малярийных плазмодиев называется минимальная концентрация возбудителей, которую возможно выявить при микроскопировании препарата «толстая капля». При заболевании этот показатель составляет 5 паразитов в одном микролитре крови. При просмотре 100 полей зрения обследуется 0,2 мкл крови.

При наличии косвенных признаков малярии (пребывание в эндемичных зонах, гипохромная анемия, обнаружение пигмента в моноцитах) и отрицательных результатов исследования препаратов «толстая капля», исследование вновь повторяется более тщательно, и не одно, а серия, состоящая из 4 — 6 препаратов при одном уколе, либо полученных при заборе крови, который производится 4 — 6 раз в сутки в течение 2 — 3 дней.

Интенсивность паразитемии определяется знаком «+».

  • 1 (+) обозначает выявление от 1 до 100 паразитов в 10 п/зр, что соответствует 5 — 50 плазмодиям в одном мкл крови;
  • 2 (+) обозначает выявление от 10 до 100 паразитов в 10 п/зр, что соответствует 50 — 500 плазмодиям в одном мкл крови;
  • 3 (+) обозначает выявление от 1 до 10 паразитов в 1 п/зр, что соответствует 500 — 5000 плазмодиям в одном мкл крови;
  • 4 (+) обозначает выявление от 10 до 100 паразитов в 1 п/зр, что соответствует 5000 — 50000 плазмодиям в одном мкл крови;
  • 5 (+) обозначает выявление более 100 паразитов в 1 п/зр, что соответствует более 50000 плазмодиям в одном мкл крови.

Интенсивность паразитемии можно вычислить по количеству паразитов на 100 эритроцитов в 10 полях зрения, либо по соотношению числа паразитов и лейкоцитов в 1 мкл крови.

По интенсивности паразитемии определяется прогноз при тропической малярии. При других видах заболевания более 2% эритроцитов не поражается.

Малярия представляет собой опасное заболевание, вызываемое малярийными плазмодиями. В современном мире появилась возможность осуществить в клинике диагностику и профилактику, а также лечение малярии на любой стадии проявления, так как медицинские учреждения располагают необходимым оборудованием для быстрого выявления заболевания.

Лечение должно производиться оперативно, это снизит риск проявления негативных последствий, которые могут повлиять на дальнейшее течение жизни человека.

Понятие о заболевании

Малярия представляет собой опасное инфекционное заболевание, которое вызвано простейшими, рода плазмодий. Инфекция попадает в организм постоянного носителя, которым выступает человек, через кровь.

Болезнь передается несколькими путями, самым частым из них является укус самок нескольких видов комаров. Источником заражения является заболевший человек или переносчик заболевания.

Малярия чаще всего диагностируется в тех местах, где наблюдаются комфортные условия для жизнедеятельности насекомых. Благоприятная среда для комаров определяется местностью с повышенным уровнем влажности и с высокими показателями температуры окружающей среды.

При условии, что температура понизилась до 15 градусов цельсия, распространение плазмодий в организме комара прекращается.

Отмечается, что все виды простейших, вызывающих малярию, практически схожи, существуют лишь некоторые особенности между ними. Основной схожестью между плазмодиями определяют возможность их проникновения в кровь человека и комара.

Лабораторная диагностика малярии помогает определить, какой именно вид возбудителя инфекции проявился у зараженного человека. Согласно результатам исследований, врач выбирает подходящие препараты для эффективного лечения.

Категорически запрещается начинать самолечение такой опасной инфекции, потому что это действие практически всегда приводит к серьезным последствиям, которые могут быть необратимы.

С чего начинается диагностика

Перед самым началом приема, пациент обязан оповестить врача о том, что находился в местах, где были отмечены случаи заболевания малярией или же, если он был в непосредственном контакте с зараженным человеком.

Диагностика малярии начинается с опроса больного, который рассказывает доктору о проявившихся симптомах. Малярия протекает по-разному, возможно тяжелое течение заболевания, характеризующиеся яркой симптоматикой и практически бессимптомное протекание болезни. В обоих случаях, в виду отсутствия подобающего лечения, распространение инфекции приводит к смерти зараженного.

После опроса пациента, врач осматривает кожные покровы больного на предмет сухости и высыпаний, которые могли быть вызваны повышением температуры во время лихорадки. Отмечается, что нередко можно заметить, что зараженный стал неестественно бледным, кожа даже может отдавать в сероватые оттенки, это может быть связанно с тем, что у человека низкий гемоглобин и повышенные эритроциты.

В случае выявления бледной кожи, наряду со специфическими для малярии обследованиями, назначается стандартный при любом обследовании общий анализ периферической крови из пальца. Лабораторное исследование проводится для того, чтобы проанализировать показатели гемоглобина, лейкоцитов, РОЭ и эритроцитов в крови.

Низкий показатель гемоглобина указывает на то, что была нарушена естественная циркуляция крови и пациент страдает опасным последствием малярии – анемией. Анемия вызывает покалывания в руках и головокружения по причине недостаточного обогащения головного мозга и органов человека кислородом.

Повышенные лейкоциты и РОЭ в любом случае будут выявлены при малярии, но врач обращает внимание на их количество. В случае если показатели сильно повышены – инфекция находится уже не на первичной стадии и требуется интенсивное и оперативное лечение.

Большая концентрация в крови белых кровяных телец – лейкоцитов, вызвана реакцией организма на распространяющуюся инфекцию в организме. Повышенный РОЭ указывает на сильный воспалительный процесс, который может быть вызван симптомами малярии – увеличением печени и селезенки.

Повышенные эритроциты могут прямо указывать на концентрацию малярийных плазмодий в организме человека.

Стоит отметить, что завышенные эритроциты могут свидетельствовать и об аллергии, поэтому только на основании повышения этого показателя диагноз поставить невозможно.

Аллергия может проявляться у людей, которые находились в странах, где отмечалась малярия, например в том случае, если были подвержены укусу насекомого, не характерного для места постоянного жительства или же употребляли непривычную пищу.

Последующая, специфическая лабораторная диагностика малярии назначается только в том случае, если у врача есть серьезные подозрения на наличие у пациента опасной инфекции.

В случае выявления серьезных отклонений от естественных показателей в крови, врач назначает не только терапию от малярии (если диагноз подтвердится), но и сопутствующее лечение осложнений, которые уже были вызваны заболеванием.

Лабораторная диагностика

Существует несколько методов диагностики малярии, которые указывают не только на наличие инфекции в организме человека, но и на стадию ее распространения. Врачи назначают сразу несколько анализов, чтобы изучить полностью всю клиническую картину.

К самым ключевым лабораторным исследованиям относятся следующие:

  • Лабораторная диагностика по изучению толстой капли крови помогает определить вид малярийного плазмодия в организме человека. Отмечается, что это самый доступный по цене анализ. Сбор биологического материала может производиться на любой стадии заболевания.
    При малярии, в общей массе красных кровяных телец просвечиваются эритроциты, которые более бледные и увеличены в размерах. Кроме вида плазмодиев, анализ толстой капли крови определяет и стадию распространения заболевания.
  • Лабораторная диагностика при изучении тонкой капли крови проводится в случае, если результаты исследовании толстой капли крови выявили подозрение на малярию. Этот анализ также помогает выявить плазмодии в организме и определить стадию распространения заболевания.
  • Отмечается иммунологическое исследование одного из видов малярии – тропического. Приведенная диагностика производится зачастую в тех местах, где наиболее распространена эта форма инфекции. Приведенный анализ может осуществить человек и самостоятельно.
    Определение определенного вида белков в крови является эспресс-тестом, а в случае негативного результата, заболевание полностью не исключается, анализ показывает лишь, что в организме пациента не обнаружена тропическая малярия.
  • Существует и другой метод исследования, который носит название серологический. Этот анализ проводится врачом и определяет наличие антител, характерных для заболевания. Приведенная диагностика используется в местах, где малярия не распространена.
    В случае если характерные антитела в крови пациента отсутствуют, опасная инфекция полностью исключается. Биологическим материалом для анализа служит венозная кровь.

При определении малярии с низким уровнем распространения плазмодий, используется иммунологическое исследование, которое носит название полимерно-цепная реакция крови. В качестве биологического материала используется венозная кровь или толстая капля периферической крови из пальца.

Этот анализ намного дороже аналогичных ему. Изучают показатели исключительно опытные лаборанты, это исследование проводится в редких случаях.

Изучение результатов анализов можно доверить только специалисту, неправильное определение диагноза может привести к катастрофическим последствиям.

Когда происходит сбор анализа крови на выявление антител

Исходя из того, что определяются несколько видов инфекции, которую диагностируют у человека, биологический материал для лабораторной диагностики инфекции может отличаться. Как правило, наибольшая результативность исследований отмечается, когда кровь у человека берут во время приступа.

Однако в промежуточный период сбор также может производиться. В зависимости от предполагаемого анализа берут венозную или периферическую кровь из пальца. В случае если поражение эритроцитов превысило 2%, у пациента диагностируется тропическая малярия.

Отсутствует вероятность, что результаты лабораторного исследования будут смазаны, в случае, если сдача крови производилась натощак, и в крови пациента не было большой концентрации противомалярийных или противовоспалительных препаратов. При условии, что данные правила не были соблюдены, врач назначает повторный сбор биологического материала.

Если один анализ выявил только подозрение на инфекцию, диагноз с полной достоверностью поставить не представляется возможным. В обязательном случае проводятся дополнительные лабораторные исследования.

В случае выявления вида малярийных плазмодий и стадии их распространения, врач назначает индивидуальное лечение. Крайне опасно принимать меры самостоятельно, потому, что терапия неподходящими лекарственными средствами может нанести больше вреда, чем пользы. Продолжительность и интенсивность лечения различны для каждого из видов малярии.

Диагностика малярии базируется на анализе клинических проявлений болезни, данных эпидемиологического и географического анамнеза и подтверждается результатами лабораторного исследования крови,

Окончательный диагноз видовой формы малярийной инфекции основан на результатах лабораторного исследования крови.

Для лабораторной диагностики применяют паразитологический и иммунологический методы исследования.

Паразитологический метод — гемоскопия тонкого мазка и толстой капли крови является ведущим. Диагноз подтверждается при обнаружении в крови любых эритроцитарных стадий плазмодиев. Надежность паразитологической диагностики зависит от уровня профессиональной подготовки лаборанта и качественного выполнения методики исследования.

Вероятность обнаружения плазмодиев в толстой капле в 20 — 40 раз выше, чем в тонком мазке, однако для определения вида возбудителя надо исследовать мазок. Кровь нужно брать независимо от подъема температуры, т. к. паразиты циркулируют в крови и в интервалах между приступами и при отсутствии клинических проявлений болезни у паразитоносителей.

При режиме исследований, рекомендуемом ВОЗ для массовых обследований, необходимо тщательно просмотреть 100 полей зрения в толстой капле. Исследование двух толстых капель в течение 2,5 мин. на каждую более эффективно, чем исследование одной толстой капли в течение 5 мин. При выявлении плазмодиев малярии в первых же полях зрения просмотр препаратов не прекращают до тех пор, пока не будут просмотрены 100 полей зрения, чтобы не пропустить возможную микст-инфекцию.

От концентрации паразитов в крови зависит вероятность их обнаружения. Минимальная концентрация паразитов, которая может быть выявлена при исследовании толстой капли, называется порогом обнаружения. При режиме, рекомендуемом ВОЗ для массовых обследований (просмотр 100 полей зрения толстой капли или 0,2 мкл крови), порог обнаружения составляет 5 паразитов в 1 мкл.

Паразитемия выше порога обнаружения носит название патентной, а ниже его — субпатентной.

При выявлении у больного косвенных признаков малярийной инфекции (пребывание в малярийной зоне, гипохромная анемия, наличие пигментофагов в крови — моноцитов с глыбками малярийного пигмента почти черного цвета в цитоплазме) надо исследовать толстую каплю более тщательно и не две, а серию — 4 — 6 при одном уколе. Кроме того, при отрицательном результате в подозрительных случаях рекомендуется забор крови проводить многократно (4-6 раз в сутки) в течение 2-3 дней.

В лабораторном ответе указывают латинское название возбудителя, родовое название Plasmodium сокращается до «Р», видовое не сокращается, а также стадии развития возбудителя (обязательно при обнаружении P. falciparum).

Для контроля эффективности лечения и выявления возможной резистентности возбудителя к применяемым противомалярийным препаратам проводят подсчет численности плазмодиев.

Через сутки после начала лечения уровень паразитемии должен снизиться на 25% и более. На 3-й день от начала лечения уровень паразитемии не должен превышать 25% исходного до начала лечения.

Наличие паразитов в препаратах крови на 4-й день после начала лечения служит показателем резистентности возбудителя к применяемому препарату. По рекомендации ВОЗ, для определения численности (степени паразитемии) можно руководствоваться впечатлением от просмотра, если:

Существует и более точный метод подсчета, основанный на сравнении числа паразитов с числом форменных элементов крови — лейкоцитов или эритроцитов.

Обнаружение в периферической крови зрелых трофозоитов и шизонтов — морул при тропической малярии свидетельствует о злокачественном течении болезни, о чем лаборатория должна срочно сообщить лечащему врачу.

У жителей эндемичных районов, обладающих частичным иммунитетом, бывает низкая паразитемия, что приводит к необходимости исследования серии толстых капель и повторения анализов крови. Затрудняют диагностику также изменения морфологии паразитов, что может быть следствием приема химиопрепаратов, а также результатом нарушений методики приготовления и окраски.

Иммунологические методы диагностики малярии основаны на обнаружении:

В практике нашли большее применение первые. Чаще других тест-систем применяется непрямая реакция иммунофлуоресценции (НРИФ). В качестве антигена для диагностики трехдневной и четырехдневной малярии служат мазки и капли крови с большим количеством шизонтов.

Для диагностики тропической малярии антиген готовится из культуры P. falciparum in vitro, поскольку у большинства больных в периферической крови шизонты отсутствуют. Поэтому для диагностики тропической малярии французская фирма BioMerieux производит специальный коммерческий набор.

Трудности получения антигена (препарат крови больного или из культуры in vitro), а также недостаточная чувствительность затрудняют внедрение НРИФ в практику.

Новые методы диагностики малярии разработаны на основе люминесцирующих иммуноферментных сывороток, а также с применением моноклональных антител.

Иммуноферментная тест-система с использованием растворимых антигенов плазмодиев малярии (РЭМА или ELISA), как и РНИФ, применяется в основном для эпидемиологических исследований.

По рекомендации А. Я. Лысенко (1999), эти реакции в неэндемичных по малярии районах могут быть полезными при скрининге доноров крови, при определении эффективности лечения, диагностике лихорадок с отрицательным результатом паразитологического исследования, ретроспективной диагностике и др.

В настоящее время доказана возможность диагностики малярии, особенно в случаях очень низкой паразитемии, с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). Однако этот метод дорогой и сложный.

Эпидемиология малярии. В естественных условиях малярия — природно-эндемичная, протозойная, антропонозная, трансмиссивная инфекция.

Источником инфекции является больной или паразитоноситель, в крови которого имеются гаметоциты. Более эффективным источником является больной, как правило, с более высокой паразитемией и малой напряженностью иммунитета. Паразитоносители имеют меньшее значение, т. к. имеют более сформированный антипаразитарный иммунитет и циркулирующие в крови антитела блокируют развитие гаметоцитов в организме переносчика.

Наиболее эффективным источником инфекции являются дети, которые более доступны для укусов комаров, т. к. поверхность их тела более оголена, и они не используют благовоний, которые отпугивают комаров. Кроме того, отсутствие иммунитета у детей сопровождается более высокой паразитемией.

Больной или паразитоноситель заразен для комара в течение всего периода наличия гаметоцитов в его крови. При трехдневной, овале- и четырехдневной малярии гаметоциты появляются с первых дней болезни и исчезают из крови одновременно с шизонтами. При тропической малярии гаметоциты поступают в кровь больного на 7 — 10-й день после начала приступов и остаются в крови достаточно долго — 1,5 — 2 месяца после исчезновения шизонтов, т. е. больные тропической малярией позже становятся источником инфекции, но дольше остаются им после исчезновения клинических симптомов.



Источник: zodiacc.ru


Добавить комментарий